蜀科低(di)速(su)冷凍離心機(ji)在實驗室(shi)樣(yang)品前處(chu)理(li)中有(you)重要的作用。今(jin)天我們來(lai)了(le)解一下前處(chu)理(li)的過程。
一、勻漿介質的制備
一般采用pH7.4,0.01mol/L Tris-HCl,1mmol/L EDTA-2Na,0.01mol/L蔗糖,0.8%氯化鈉溶液或直接用0.86%的生理鹽水作為勻漿介質。
二(er)、組織勻漿(jiang)的(de)制備
1、取組織塊(0.1g~0.2g)少可到2~5mg在冰冷的(de)生(sheng)理(li)鹽水中漂洗,除去血液,濾紙拭干,準(zhun)確稱重,放入5ml的(de)勻漿管(guan)中。
2、按重量(liang)(g):體(ti)積(ml)=1:9的比例(li)加(jia)入(ru)9倍體(ti)積的勻漿介質(pH7.4,0.01mol/L Tris-HCl,1mmol/LEDTA-2Na,0.01mol/L蔗糖,0.8%的氯化鈉溶液(ye))或者0.86%的生理鹽(yan)水于(yu)勻漿管中,冰水浴條(tiao)件下,用眼科小(xiao)剪盡快(kuai)剪碎(sui)組織塊。
3、勻漿(jiang)(jiang)的方式有多種:手(shou)工勻漿(jiang)(jiang),機(ji)器勻漿(jiang)(jiang),超(chao)聲粉(fen)碎。
①手(shou)工勻漿:左手(shou)持勻漿管(guan)將下端(duan)插(cha)入盛有冰(bing)水混合物的(de)器皿中(zhong),右手(shou)將搗(dao)桿垂直插(cha)入套管(guan)中(zhong),上(shang)下轉動研(yan)磨數十次(ci)(6~8分鐘),充(chong)分研(yan)碎,制(zhi)成(cheng)10%的(de)勻漿液(ye)。
②機(ji)器(qi)勻(yun)漿(jiang):用(yong)組織搗碎機(ji)10000~15000轉/分上(shang)下研(yan)磨制成10%組織勻(yun)漿(jiang),也可(ke)用(yong)內切式組織勻(yun)漿(jiang)機(ji)制備(勻(yun)漿(jiang)時(shi)(shi)間10秒/次(ci),間隙30秒,連續3~5次(ci),在冰水中進行(xing)),皮(pi)膚、肌肉組織等可(ke)延長勻(yun)漿(jiang)時(shi)(shi)間。
③超聲(sheng)(sheng)(sheng)粉碎(sui):用超聲(sheng)(sheng)(sheng)粉碎(sui)機(ji)進行(xing)粉碎(sui),可(ke)用Soniprep150型超聲(sheng)(sheng)(sheng)波(bo)發生器(qi)以(yi)振幅(fu)14微米(mi)超聲(sheng)(sheng)(sheng)處理30秒使細胞破碎(sui),也(ye)可(ke)用國產超聲(sheng)(sheng)(sheng)波(bo)發生儀,用400安培,5秒/次,間隙10秒反復3~5次。
鏡檢(jian)觀察:取少(shao)量組織勻(yun)漿作涂片(pian)(直(zhi)接涂片(pian)、染(ran)色均(jun)可以(yi)),顯微鏡下觀察細胞是否破碎(sui),若沒有則可延長(chang)勻(yun)漿時(shi)間(jian)。
4、將(jiang)制備好的10%勻漿(jiang)液(ye)用蜀科低速冷凍離心機2500轉(zhuan)/分左右,離心(xin)10~15分鐘,取上清液進(jin)行測(ce)定.
三、樣本保存
動物組織樣本暫時不測定,可立即低溫凍存,溫度越低越好,中間如*凍融,-20℃以下可保存三個月,-70℃以下可保存六個月。
制備好的(de)勻漿液建議不要凍存(cun)(cun),好當天(tian)進行測定(ding),如放(fang)(fang)置時間過長相關酶活會有所下降,部(bu)分指標4℃可存(cun)(cun)放(fang)(fang)3~5天(tian)(如SOD要存(cun)(cun)放(fang)(fang)2~3天(tian),MDA可存(cun)(cun)放(fang)(fang)3~5,總蛋白測定(ding)可存(cun)(cun)5~7天(tian)等)。
在(zai)實驗室樣品(pin)前處理(li)中,蜀科低速冷凍離心機發揮了重要(yao)作用。蜀科低速冷凍離心機(ji)加(jia)熱制冷速度快,精度高,操作簡單,性能穩定、安全可靠,是各實(shi)驗室選購的(de)明智選擇!
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