蜀科臺(tai)式低速(su)離心機操作簡(jian)單(dan)、運行平(ping)衡(heng)、性能穩(wen)定(ding)、安(an)全可靠，廣泛(fan)應用(yong)于，放射免(mian)疫(yi)、生物化學、食品衛(wei)生、環保等科(ke)研領域(yu)。今天來科(ke)普一下如(ru)何(he)用(yong)蜀科(ke)臺(tai)式低速離心機制備大腸桿菌感受態細(xi)胞，給各位實驗室(shi)的朋友參考(kao)。
 

1.先將受體(ti)大腸桿菌(jun)接(jie)種于LB培養基中(zhong)活(huo)化，置于恒(heng)溫培養箱中(zhong)37℃培養過(guo)夜。。。

2.接著取(qu)一(yi)丁點(dian)（槍(qiang)頭沾一(yi)下(xia)）上(shang)述大腸桿菌培養(yang)物菌落接種于3-5毫升LB試(shi)管中，于恒溫振蕩(dang)器上(shang)，37℃振蕩(dang)培養(yang)過夜(ye)（約12-16 小時(shi)）。

4.再是用移液(ye)(ye)管(guan)無菌(jun)條件下，取過夜培(pei)養液(ye)(ye)1 毫(hao)升，接(jie)種于新鮮的LB 中（100毫(hao)升LB/250毫(hao)升三角(jiao)瓶，接(jie)種量按菌(jun)液(ye)(ye)濃度(du)而定，一(yi)般在(zai)1%左右(you)），于恒溫振蕩(dang)器上37℃培(pei)養2―3 小時。

5.無菌(jun)(jun)條件(jian)下(xia)將上述1 毫升菌(jun)(jun)液倒入(ru)1.5毫升EP 管中（離心管應帶蓋并高壓(ya)滅菌(jun)(jun)過），每(mei)組2支。

6、帶菌液的(de)離(li)心(xin)管置于冰(bing)上(shang)10 分鐘，冷(leng)卻菌液，平衡好，置于蜀科臺式低(di)速離(li)心(xin)機上(shang)，3500r/min 離(li)心(xin)5 分鐘。

7、無菌條件(jian)下(xia)(xia)，倒去(qu)上(shang)清LB，倒斜(xie)離(li)心管，讓(rang)LB 流干，留(liu)下(xia)(xia)沉淀菌體，加入預冷的100mmol/L CaCl2溶液600微(wei)升，用(yong)微(wei)量取樣器輕(qing)(qing)輕(qing)(qing)吸(xi)沖底(di)部沉淀菌體，使其懸(xuan)浮(fu)后，把(ba)2支(zhi)管轉為1支(zhi)，搖勻(yun)后于冰浴(yu)中放置30分鐘。

8、重新將CaCl2 菌懸浮液置于蜀科臺式低(di)速離心機上，3500r/min離心10分鐘，小(xiao)心側倒掉上清CaCl2 ，留(liu)沉淀菌體。

9、再把菌(jun)體(ti)懸浮在200 微升100mmol/L CaCl2 的(de)溶液中，置于(yu)冰(bing)上作為轉化的(de)受體(ti)菌(jun)液。此制(zhi)備的(de)感受態細胞應在此步后1小時24小時內使用，效率比較高。

10.在事(shi)先制備好的含50μg/ml Amp的LB 平板(ban)表面加40ml X-gal 儲(chu)液(ye)和4μl IPTG儲(chu)液(ye),用無菌玻(bo)棒將溶液(ye)涂勻,置于37℃下放置3-4小時,使培養(yang)基表面的液(ye)體*被吸收，備用。

  上面的應用對大家有幫助嗎？操作中的蜀科TD-5Z臺式低(di)速離(li)心機榮獲2016“國(guo)產好儀(yi)器”殊榮，是國(guo)內各(ge)大實驗室、、生物科技(ji)、食品(pin)環保等單位*的儀(yi)器。如果您也有(you)需要，趕(gan)快(kuai)吧！