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臺式高速離心機密度梯度離心法介紹

更新時間:2016-06-28      點擊次數:5497

  在實際(ji)使(shi)用中,根(gen)據樣(yang)品的不同需要使(shi)用臺式(shi)高速(su)離心機采用不同的(de)分(fen)離(li)(li)方(fang)法進行分(fen)離(li)(li)。分(fen)離(li)(li)方(fang)法一般有三種,今天介紹密(mi)度梯度離(li)(li)心(xin)法。

  密(mi)度(du)(du)(du)(du)梯度(du)(du)(du)(du)離(li)(li)心(xin)也稱(cheng)為平衡密(mi)度(du)(du)(du)(du)梯度(du)(du)(du)(du)離(li)(li)心(xin)。密(mi)度(du)(du)(du)(du)梯度(du)(du)(du)(du)離(li)(li)心(xin)是根據樣品中各組分(fen)的(de)(de)(de)浮(fu)力(li)密(mi)度(du)(du)(du)(du)差不同進行分(fen)離(li)(li)。在(zai)離(li)(li)心(xin)場中,溶液(ye)(ye)中顆(ke)粒(li)浮(fu)力(li)密(mi)度(du)(du)(du)(du)小(xiao)(xiao)則上(shang)浮(fu),浮(fu)力(li)密(mi)度(du)(du)(du)(du) 大則下沉(chen),上(shang)浮(fu)和下沉(chen)的(de)(de)(de)顆(ke)粒(li)會一(yi)直(zhi)延梯度(du)(du)(du)(du)液(ye)(ye)移(yi)動到與其(qi)浮(fu)力(li)密(mi)度(du)(du)(du)(du)恰好(hao)相等(deng)的(de)(de)(de)位置上(shang),該位置也稱(cheng)顆(ke)粒(li)的(de)(de)(de)等(deng)密(mi)度(du)(du)(du)(du)點,離(li)(li)心(xin)時樣品各組分(fen)顆(ke)粒(li)將按其(qi)密(mi)度(du)(du)(du)(du)大小(xiao)(xiao)分(fen)別移(yi)等(deng)密(mi)度(du)(du)(du)(du)點形成區帶(dai),形成的(de)(de)(de)區帶(dai)不會因離(li)(li)心(xin)時間長而發生(sheng)變(bian)化(hua)。離(li)(li)心(xin)后(hou)收集所需區帶(dai)顆(ke)粒(li)即為純化(hua)組分(fen)。離(li)(li)心(xin)前后(hou)樣品的(de)(de)(de)狀態如下圖所示(shi)。

 

  因此,在離心前,樣品可置于梯度液的任意位置,一般是均勻分布在梯度液中。等密度區帶離心法的離心效果取決于樣品顆粒的浮力
密度差,密度差越大,分離效果越顯著,與樣品顆粒的大小與現狀無關。
等密度(du)(du)梯度(du)(du)離心經常使用的(de)(de)(de)梯度(du)(du)液包括氯化銫(CsCI)、溴化鈉(na)等,典型的(de)(de)(de)應用包括質(zhi)粒DNA(或者其他DNA、RNA片段)的(de)(de)(de)大規模高(gao)純度(du)(du)純化,脂蛋(dan)白的(de)(de)(de)分(fen)離純化等。
質粒DNA的氯化銫等密度梯度離心分離純化流程如下: 
 

  

脂(zhi)蛋白(bai)溴(xiu)化(hua)(hua)鈉(na)等密度梯度離心分離純化(hua)(hua)流程如(ru)下:

1)人全(quan)血1000 g離心10分鐘去除(chu)各種血細胞,上清為血清。

2)血清(qing)加入NaBr密度(du)梯度(du)液(ye)(不連續梯度(du))的(de)底部,往上依次鋪濃(nong)度(du)變小的(de)梯度(du)液(ye)。

3)然(ran)后在水平轉頭中,260,000 g離(li)心(xin)力14℃下(xia)離(li)心(xin)24小時,各(ge)種密度(du)(du)的脂蛋白從(cong)管底浮向它(ta)們自己的等密度(du)(du)區形成了(le)純的各(ge)種密度(du)(du)脂蛋白區。而(er)離(li)心(xin)管底部保(bao)留著各(ge)種血清(qing)蛋白。
4)用上排法從離心(xin)管中(zhong)抽出(chu)格層(ceng)液體(ti),經(jing)DU蛋白分析儀測(ce)定,定位各種不(bu)同密度血清脂(zhi)蛋白。 

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