摘要：研究(jiu)丹參酮(tong)IIA、隱丹參(can)酮和丹參(can)酮I組(zu)合(he)物（組(zu)合(he)物）在斑馬魚體內的代謝(xie)，探討斑馬魚用于中藥多組(zu)分代謝(xie)研究的可(ke)行性(xing)及合(he)理性(xing)。

方法

2.1分組與給藥

取斑(ban)馬魚(yu)成魚(yu)，平均(jun)分(fen)成2組(zu)，每組(zu)5條(tiao)，分(fen)別(bie)(bie)置于30 mL含有(you)1% DMSO純凈水（空白魚(yu)組(zu)）、含丹(dan)參(can)(can)酮IIA、隱丹(dan)參(can)(can)酮和丹(dan)參(can)(can)酮I組(zu)合物(wu)（丹(dan)參(can)(can)酮IIA、隱丹(dan)參(can)(can)酮、丹(dan)參(can)(can)酮I質量濃度分(fen)別(bie)(bie)為1.57、1.02、2.09μg/mL）的1% DMSO純凈水溶液（給(gei)藥魚(yu)組(zu)）棕(zong)色瓶中(zhong)，同時(shi)設空白藥物(wu)組(zu)（組(zu)合物(wu)1% DMSO純凈水溶液）。

2.2樣品采集與(yu)處理

給藥(yao)(yao)魚(yu)組(zu)(zu)分(fen)別于(yu)(yu)斑馬(ma)(ma)魚(yu)暴露藥(yao)(yao)液后0、1、2、4、6、8、12、18、24 h取(qu)(qu)(qu)藥(yao)(yao)液4 mL各2份(fen)(fen)，24 h將(jiang)魚(yu)取(qu)(qu)(qu)出，用純凈水迅速洗滌3次，殺掉(diao)，去除(chu)魚(yu)鰭和(he)魚(yu)磷，稱(cheng)質量，于(yu)(yu)−70 ℃冰(bing)箱放置。各時(shi)間(jian)點(dian)斑馬(ma)(ma)魚(yu)藥(yao)(yao)液各2份(fen)(fen)分(fen)別混合(he)，于(yu)(yu)−70 ℃冰(bing)箱放置。空(kong)白(bai)藥(yao)(yao)物(wu)組(zu)(zu)于(yu)(yu)斑馬(ma)(ma)魚(yu)暴露藥(yao)(yao)液后0、24 h時(shi)同(tong)法取(qu)(qu)(qu)樣。將(jiang)不同(tong)時(shi)間(jian)點(dian)取(qu)(qu)(qu)出的斑馬(ma)(ma)魚(yu)藥(yao)(yao)液冷凍干燥，殘渣加0.5 mL甲醇溶解，過0.22 μm濾(lv)膜(mo)，濾(lv)液20 μL進行HPLC-MS分(fen)析。取(qu)(qu)(qu)24 h空(kong)白(bai)魚(yu)組(zu)(zu)和(he)給藥(yao)(yao)魚(yu)組(zu)(zu)斑馬(ma)(ma)魚(yu)，混合(he)，剪碎，稱(cheng)取(qu)(qu)(qu)1 g，加5 mL生理鹽水勻漿，用蜀科高速冷凍離心機3 500 r/min離(li)心10 min，上清液(ye)(ye)用等(deng)體(ti)(ti)積(ji)醋(cu)酸乙酯萃(cui)取3次，合并萃(cui)取液(ye)(ye)，氮氣吹干(gan)，殘渣(zha)加1 mL甲醇溶(rong)解(jie)制(zhi)成1 g/mL的溶(rong)液(ye)(ye)，過0.22 μm濾膜，濾液(ye)(ye)20 μL進行HPLC-MS分析。

結果

組(zu)合物經斑(ban)馬魚作用(yong)后(hou)，產(chan)生丹(dan)參(can)酮IIA和(he)(he)隱丹(dan)參(can)酮的羥基化(hua)和(he)(he)脫(tuo)氫產(chan)物(wu)，未(wei)發現丹參酮I的代謝產物。

結(jie)論(lun)

斑馬(ma)魚對(dui)組合物的代謝與大(da)鼠(shu)或(huo)鼠(shu)肝微粒體的代謝機(ji)制高度一致，提示斑馬(ma)魚對(dui)該組合物(wu)的代(dai)謝具合理性，且具有化合物(wu)用量少、成本低、簡(jian)單、等優點，為斑馬魚(yu)用于復(fu)雜的中藥體系代(dai)謝研(yan)究提供依據。

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